乐学 小分子活性肽对人体有害吗
一：为什么有的人服用肽效果不明显？
答：肽是一种特殊医疗级食品，不是药品，所以有的人短期内服用肽效果不明显很正常，而且肽根据体质和身体状况，对细胞的修复、新陈代谢功能的激活，需要一段时间，长期服用对人体是有益的。
二：活性肽有多少种？
答：肽是两个或两个以上的氨基酸以肽键相连的化合物，在人体内起重要的生理作用，发挥生理功能。具有活性的多肽称为活性肽，又称生物活性肽或生物活性多肽。目前现在发现的肽有5000多种。
三：肽是否可以和药品同时吃？服用肽多久能感到效果？
答：可以和药品同时使用，但是不能直接代替药物，跟药物等任何物质没有禁忌，建议循序渐进的使用，逐步增加食用量，来达到抑制病情，强身健体的作用。人摄入任何物质都有一个适应的过程，好转反应一般在7到15天左右，但因个人服用量、生活习惯、年龄、疾病、体质、健康状况不同而有所差异。身体健康情况较差的人，有时好转反应不会一下子全部发生，而是逐渐的在不同部位发生。人体细胞的更替周期约是120-200天不等（神经细胞除外），通过服用肽产品，全面调理身体机能，也需要一定的周期。周期越长，这也就说明身体更新的越慢，也就说明了身体状况相当不好，需要较别人更长时间的服用。
四：肽可以缓解疲劳吗？
答：确实可以。肽能够延长运动时间，减少血液中乳酸的含量，具有明显的缓解疲劳左右，起抗疲劳作用与增强抗氧化酶活性（以减轻长时间耐力运动导致自由基产生过多而对骨骼肌和心肌的损伤）和降低脑组织中NOS活性（以减少NO生成过量后中枢疲劳的发生）以及增强机体有氧代谢能力等作用有关。还原肽被肠道吸收的速度比蛋白质和氨基酸快的多，可在20分钟内被人体有效吸收，且不需要消耗人体能量，这对机体获取充分的氨基酸源，迅速修复受损肌肉，消除疲劳，具有重要作用。
五：肽能排除胆固醇，降低血脂和胆固醇吗？
答：人体在消化、吸收胆固醇的时候，需要胆囊分泌的胆汁酸帮助。肽在吸收过程中刺激十二指肠的分泌，引起胆囊的强烈收缩，促进胆汁酸化，破坏胆固醇的吸收，使胆固醇随着胆汁不断的排到肠腔，带入大肠，减少了肠对胆固醇的吸收利用，达到降低胆固醇的目的。这也是经过大量的实验证明，安全可靠。
六：使用肽会出现过敏吗？
答：肽本来是人体的内源性物质，目前没有发现任何过敏人群。相反有些过敏性鼻炎、皮肤敏感人群服用一段时间后感觉都有明显好转。
七：肽里面有添加剂吗？
答：从食物中提取出来的天然接近人体自身分泌的肽成分，是不含有任何添加剂的。如果把它做成最终的成品是要添加进口的含天然成分的食品添加剂，含量在国家规定范围内，对身体没有任何伤害。
八：什么是医学营养食品？
答：医疗食品（Medical foods,MF）,是指所有具有特殊保健目的，并须在医疗监护下使用的食品。该定义由美国食品和药物管理署(FDA)于1989年规定，并使用“医疗食品”这一称呼。
九：肽属于医学营养食品吗？
答：动物蛋白质营养研究已进入一个新阶段：肽营养阶段。肽营养理论建立在蛋白质代谢的中间产物——生物活性肽，其作为功能营养物全面发挥作用。
从天然动、植物蛋白质中利用现代生物工程技术分离、提取肽、是肽营养学的核心，也称之为肽营养疗法。
十：肽和保健品的区别？
答：肽是通过基因的指导而产生的内在物质或外界给与的同源营养物质。是一类由氨基酸组成比蛋白质小，具有营养和调节生理功能的小分子化合物。肽也具有保健功能，然后根据不同情况会有针对性的修复和治疗功能，更能有效的帮助你使身体恢复正常。
保健品是指声称具有特定保健功能或者以补充维生素、矿物质为目的的食品，即适宜于特定人群食用，具有调节机体功能，不以治疗疾病为目的，并且对人体不回产生任何急性、亚急性或者慢性危害的食品。
共性：都能提供人体生存必需的基本营养物质（食品第一功能）
两者也有很大的区别：
（1）保健食品含一定量功效成分，能调节人体机能，具有特定功能：
肽是医疗级食品，更具有目的性和针对性，具有药物的延伸性，调节人体的平衡。
（2）保健食品一般有特定食用范围（特定人群），而肽适用于所有人群。
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有还原烷基化蛋白质消化 *** 作流程1. 将所选择的胶点用1.5mm切胶笔切下，置于eppendorf (EP) 管或96孔PCR板
中,并记录点号及相应的位置；
2. 加50μL DD.H2O 洗两次，10min/次；
3. 加50 mM NH4HCO3/乙腈=1：1溶液50μL，超声脱色5min或37℃脱色20min，
吸干；
4. 重复步骤3，直至蓝色褪去；
5. 加乙腈50μL脱水至胶粒完全变白，真空抽干5min；
6. 加10 mM 二硫苏糖醇DTT（10μL 1M DTT，990μL 25mM NH4HCO3配制） 20
μL，56℃水浴1hr；（1.54mg/ml）
7. 冷却到室温后，吸干，快速加55 mM 碘代乙酰胺IAM （55μL 1M IAM，945
μL 25mM NH4HCO3配制）20μL，置于暗室45min； （10.2mg/ml）
8. 依次用25 mM NH4HCO3、50％乙腈溶液和乙腈洗，乙腈脱水到胶粒完全变白为
止，真空抽干5min；
9. 将0.1μg/μL的trypsin酶储液以25 mM NH4HCO3稀释10倍，每EP管加2μL，
稍微离心一下，让酶液充分与胶粒接触，4℃或冰上放置30min，待溶液被胶块完全吸收，加25mM NH4HCO3 10-15μL置37℃，消化过夜；
10. 加入2%TFA（三氟乙酸）终止反应，使TFA终浓度为0.1％，振荡混匀，离心。
说明:
1.每加一次溶液都要漩涡振荡，胶粒要完全浸没在溶液中，进行下一步 *** 作前要把溶液吸走。
2．如果胶粒超过1.5mm3,把胶粒分成约为1.5mm3大小再进行脱色，使用的各种溶液的量也相应增加。
3．实验过程中一定要注意使用的溶液和器具的洁净，防止角蛋白污染，并戴口罩和帽子。
4．银染蛋白质点胶内消化不要脱色，步骤3、4省略, 如果需要脱色，使用100mM Na2S2O3与30mM K3Fe（CN）6 1：1混合溶液，脱色后用水洗到胶颜色透明为止。
需要准备的试剂：
乙腈，碳酸氢铵，DTT，IAM，trypsin，TFA，水
Digest SOP
双向电泳考染点无还原烷基化胶内消化 *** 作流程
1．将所选择的胶点用1.5mm切胶笔切下，置于eppendorf (EP) 管或96孔PCR板
中, 并记录点号及相应的位置；
2．加30μL DD.H2O 洗两次，10min/次；
3． 加50 mM NH4HCO3/乙腈=1：1溶液30μL，超声脱色5min或37℃脱色20min，吸干；
4．重复步骤3，直至蓝色褪去；
5．加乙腈30μL脱水至胶粒完全变白，真空抽干5min；
6．将0.1μg/μL的酶储液以25 mM NH4HCO3稀释10倍，每EP管加2μL，稍微离心一下，让酶液充分与胶粒接触，4℃或冰上放置30min，待溶液被胶块完全吸收，加25mM NH4HCO3 10-15μL置37℃，消化过夜；
7．加入2%TFA终止反应，使TFA终浓度为0.1％，振荡混匀，离心。
说明:
1. 每加一次溶液都要漩涡振荡，胶粒要完全浸没在溶液中，进行下一步 *** 作前要把溶液吸走。
2．如果胶粒超过1.5mm3,把胶粒分成约为1.5mm3大小再进行脱色，使用的各种溶液的量也相应增加。
3．实验过程中一定要注意使用的溶液和器具的洁净，防止角蛋白污染，并带口罩和帽子。
Digest SOP
全蛋白溶液消化 *** 作规程
一、 试剂：
1．变性缓冲液：6M Guanidine-HCl，50mM Tris-HCl,(pH8.0)或6-8M 尿素，50mM
Tris-HCl,(pH8.0)
2．1M DTT
3．1M IAM
4．50mM NH4HCO3(pH7.8)
5．Trypsin酶
二、 *** 作步骤：
1．将蛋白溶解于6M Guanidine-HCl或6-8M 尿素或0.1% SDS, 50mM
Tris-HCl,(pH8.0)
2．往溶液中加入1M DTT至终浓度2-5mM
3．95℃加热15-20min或者60℃加热45-60min，冷却至室温；
4．加入1M IAM至终浓度10-25mM，室温暗处孵育45min；
5．加入50mM NH4HCO3(pH7.8)稀释Guanidine-HCl或尿素至终浓度不超过1M；
6．按Trypsin酶与底物蛋白的量之比在1：20-1：100之间，加入酶液，37℃孵
育8-12Hr
7．再次加入同等剂量的Trypsin酶溶液，室温孵育24Hr；
8．加入2%的甲酸（FA）到终浓度0.1%终止反应；
9．浓缩样品到合适的体积。
注意事项：
1．样品中避免存在以下常见的胰蛋白酶抑制剂
Antipain (50µg/ml), antithrombin (1unit/ml), APMSF (0.01–0.04mg/ml), aprotinin
(0.06–2µg/ml), leupeptin (0.5µg/ml), PMSF (17–170µg/ml), TLCK (37–50µg/ml),
trypsin inhibitors (10–100µg/ml).
Digest SOP
SDS-PAGE蛋白质条带消化 *** 作流程
1. 将所选择的胶条用手术刀片切下，置于eppendorf (EP) 管中,并记录条带号及相
应的位置；
2. 把条带切成2mm3大小；
3. 加200μL DD.H2O 洗两次，10min/次；
4. 加50 mM NH4HCO3/乙腈=1：1溶液200μL，超声脱色5min或37℃脱色20min，
吸干；
5. 重复步骤4，直至蓝色褪去；
6. 加乙腈200μL脱水至胶粒完全变白，真空抽干5min；
7. 加10 mM DTT（10μL 1M DTT，990μL 25mM NH4HCO3配制） 50μL，56℃
水浴1hr； (10mM DTT 1.54mg/ml)
8. 冷却到室温后，吸干，快速加55 mM IAM （55μL 1M IAM，945μL 25mM
NH4HCO3配制）50μL，置于暗室45min； (55mM IAM 10.2mg/ml)
9. 依次用25 mM NH4HCO3、50％乙腈溶液和乙腈洗，乙腈脱水到胶粒完全变白为
止，真空抽干5min；
10. 将0.1μg/μL的酶储液以25 mM NH4HCO3稀释10倍，每EP管加40μL，稍微
离心一下，让酶液充分与胶粒接触，4℃或冰上放置30min，待溶液被胶块完全吸收，吸走多余的酶液，加25mM NH4HCO3 30-45μL置37℃，消化过夜；
11. 加入2%甲酸FA终止反应，使FA终浓度为0.1％，振荡混匀，离心；
12. 取出溶液转到新的EP管，加50ul 60%ACN含0.1%FA的溶液超声20min萃取，
合并溶液；
13. 溶液真空干燥；
14. 加入0.1%FA的水溶液20ul溶解多肽。
说明:
1.每加一次溶液都要漩涡振荡，胶块要完全浸没在溶液中，进行下一步 *** 作前要把溶液吸走。
2．实验过程中一定要注意使用的溶液和器具的洁净，防止角蛋白污染，并带口罩和帽子。
3. 酶液不要反复冻融。
4. 银染不用脱色，可以减少第4，第5步，如果想要脱色，可以用30mM K3Fe(CN)6与100mM的溶液1：1混合，银颜色褪去后，用25mM NH4HCO3溶液洗到胶颜色透明，
接着第6步。
5. 如果用MALDI检测，第14步加入0.1%TFA的水溶液5-10ul溶解多肽。
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